Laboratoriniai kiaušinio baltymo tyrimo metodai
Šiame straipsnyje aptariami laboratoriniai tyrimo metodai, skirti kiaušinio baltymo alergijai nustatyti, įskaitant molekulinę diagnostiką ir provokacinius mėginius. Straipsnyje remiamasi Lietuvos Respublikos sveikatos apsaugos ministerijos įsakymais, Europos Sąjungos direktyvomis ir kitais moksliniais šaltiniais.
Įvadas
Alergija maistui tampa vis didesne problema, o tiksli diagnostika yra būtina norint užtikrinti tinkamą gydymą ir gyvensenos rekomendacijas. Kiaušinio baltymas yra vienas iš labiausiai paplitusių maisto alergenų, ypač tarp vaikų. Alergijos kiaušiniams simptomai gali svyruoti nuo lengvų odos reakcijų iki sunkių anafilaksinių šokų. Todėl svarbu suprasti, kaip atliekami laboratoriniai kiaušinio baltymo tyrimai ir kokią informaciją jie suteikia.
Baltymų struktūra ir sandara
Alergenai dažniausiai yra baltymai, kurių sudėtis gali būti labai įvairi - nuo paprastų junginių iki sudėtingų struktūrų. Alergeną gali sudaryti daug skirtingų baltymų, kai kurie iš jų gali sukelti alergines reakcijas. Kiekvienas alergeno komponentas susideda iš kelių sudėtinių dalių, vadinamų epitopais, kurie yra trimatės specifinio antikūno prisijungimo vietos.
Baltymų struktūra
Baltymų struktūrą sudaro aminorūgščių seka, kuri nulemia baltymo savybes ir funkcijas. Žinios apie baltymo struktūrą, priklausymą alergenų šeimai, atsparumą fiziniams ir fiziologiniams veiksniams leidžia racionaliai naudoti alergenų komponentus alerginių ligų diagnostikai.
Baltymų sandara
Baltymų sandara apima pirminę, antrinę, tretinę ir ketvirtinę struktūras. Pirminė struktūra yra aminorūgščių seka, antrinė - lokalių struktūrų, tokių kaip alfa spiralės ir beta klostės, susidarymas. Tretinė struktūra apibūdina visos baltymo molekulės trimatę formą, o ketvirtinė - kelių baltymo subvienetų susijungimą.
Taip pat skaitykite: Baltymų plakimo technikos
Baltymų funkcijos
Baltymai atlieka įvairias funkcijas organizme, įskaitant fermentų katalizę, struktūrinę paramą, transportavimą ir imuninę apsaugą. Alergenų atveju, baltymų funkcijos gali būti susijusios su augalų apsauga nuo kenkėjų ar kitų aplinkos veiksnių.
Alergijos kiaušiniams diagnostika
Diagnostika pradedama nuo paciento simptomų nustatymo ir fizinio ištyrimo. Taip sužinome paciento ligos trukmę, simptomų pasireiškimo laiką (simptomai pasireiškia nuolat ar būdingas sezoniškumas), kitas su alergija susijusias gretutines ligas.
Odos dūrio mėginiai
Odos dūrio mėginiais netiesiogiai nustatomi antikūnai prieš specifinius alergenus. Odos dūrio mėginiai yra greitas ir patogus būdas nustatyti, ar žmogus yra alergiškas tam tikram alergenui. Mėginio metu ant odos užlašinamas alergeno ekstraktas ir oda pradurta. Jei žmogus alergiškas, toje vietoje susidaro paraudimas ir patinimas.
Specifinių IgE tyrimai
Specifiniams antikūnams (sIgE) nustatyti naudojami alergenų ekstraktai. Specifinių IgE tyrimai yra kraujo tyrimai, kurie nustato, ar žmogaus kraujyje yra antikūnų prieš tam tikrą alergeną. Padidėjęs specifinių IgE kiekis rodo, kad žmogus yra įsijautrinęs tam alergenui, tačiau nebūtinai alergiškas.
Molekulinė diagnostika
Kai atliekami tik įprastiniai sIgE tyrimai, lieka neaišku, kuris būtent baltymo komponentas (molekulė) sukėlė alerginę reakciją. Tam išsiaiškinti reikalingas II-ojo etapo tyrimas - molekulinio lygio analizė. Kai tyrimas atliekamas molekuliniu lygiu, tikrinama, ar pacientas yra alergiškas ne visam alergenui, o tik tam tikriems jo sudėtyje esantiems baltymams.
Taip pat skaitykite: Tradiciniai kiaušinių mišrainės receptai
Alergenų komponentai
Alergenų komponentai gaunami dviem technologiniais būdais: rekombinantiniai komponentai, pasitelkus biotechnologijas, yra susintetinami laboratorijoje, arba iš alergenų ekstraktų išgryninami natūralūs komponentai. Alergenų komponentai yra svarbūs imunoterapinių ekstraktų standartizavimo procese, nes tai leidžia kontroliuoti alergenų specifinei imunoterapijoje naudojamų ekstraktų vienodą ir stabilią komponentinę sudėtį.
Molekulinės diagnostikos nauda
Išsiaiškinus paciento įsijautrinimą iki molekulinio lygmens galima ne tik tiksliau diagnozuoti ligą, bet ir sudaryti tinkamą gyvensenos planą bei paskirti veiksmingesnį gydymą. Molekuliniai tyrimai padeda išvengti nereikalingų dietų, sumažėja provokacinių mėginių poreikis.
Provokaciniai mėginiai
Norint patvirtinti alergiją maistui, visada turi būti atliekami provokaciniai mėginiai. Provokacinis mėginys yra auksinis standartas alergijos diagnostikoje. Mėginio metu pacientui duodamas nedidelis kiekis įtariamo alergeno, o tada stebima, ar pasireiškia alerginė reakcija. Provokaciniai mėginiai turi būti atliekami prižiūrint gydytojui, nes gali sukelti sunkias alergines reakcijas.
Kiaušinio baltymo alergenų komponentai
Kiaušinio baltymas yra pagrindinis alergenų šaltinis kiaušinyje. Išskiriami 5 pagrindiniai kiaušinio alergenų komponentai (Gal d 1 -5). Kiekvienas jų pasižymi skirtingomis alergeninėmis savybėmis.
Gal d 1 (Ovomukoidas)
Didelė specifinių IgE antikūnų prieš Gal d 1 koncentracija rodo didelę alerginės reakcijos riziką pavartojus tiek žalio, tiek termiškai apdoroto kiaušinio. Jei Gal d 1 antikūnų titras mažas ar jų neaptinkama - toleruojamas stipriai termiškai apdorotas kiaušinis, pavyzdžiui, sausainiuose. Ovomukoidas (Gal d 1) yra pagrindinis vištų kiaušinių alergenas, išliekantis aktyvus net ir termiškai apdorotuose kiaušiniuose.
Taip pat skaitykite: Receptai šeimai: kotletai
Gal d 2 (Ovalbuminas)
Esant sensibilizacijai ovalbuminui (Gal d 2), galima reakcija į gripo bei geltonosios karštinės vakcinas, nes jos gaminamos iš viščiuko embriono ir vakcinoje gali likti šio baltymo pėdsakų. Ovalbuminas (Gal d 2) yra labilus, karščiui neatsparus baltymas. Jo alergeniškumas stipriai sumažėja gerai pakaitinus.
Gal d 3 (Konalbuminas)
Konalbuminas (Gal d 3) yra labilus, karščiui neatsparus baltymas. Jo alergeniškumas stipriai sumažėja gerai pakaitinus. Kai kraujyje aptinkama specifinių IgE antikūnų prieš Gal d 2, Gal d 3 bei Gal d 4, pacientui alerginė reakcija išsivysto suvartojus žalio ar mažai termiškai apdoroto kiaušinio.
Gal d 4 (Lizocimas)
Lizocimas (Gal d 4) naudojamas kaip konservantas (žymimas E 1105) kai kuriuose farmacijos produktuose, taip pat brandintame sūryje, vyne. Lizocimas (Gal d 4) yra labilus, karščiui neatsparus baltymas. Jo alergeniškumas stipriai sumažėja gerai pakaitinus. Kai kraujyje aptinkama specifinių IgE antikūnų prieš Gal d 2, Gal d 3 bei Gal d 4, pacientui alerginė reakcija išsivysto suvartojus žalio ar mažai termiškai apdoroto kiaušinio.
Gal d 5 (Livetinas)
Livetinas (Gal d 5) yra kiaušinio trynio baltymas, kuris gali sukelti alergines reakcijas.
Alergijos maistui ir kryžminės reakcijos
Alergija yra imuninės sistemos atsakas į tam tikrą dirgiklį, kuris iš esmės žmogui nėra pavojingas. Paprastai alerginis atsakas vystosi į maiste esančius baltymus. Kryžminės reakcijos gali pasireikšti, kai alergenų komponentai yra panašūs į kitų alergenų komponentus. Pavyzdžiui, jei žmogus alergiškas beržo žiedadulkėms, didelė tikimybė, kad, suvalgius lazdyno riešutų ar žalią morką, jam atsiras niežulys burnoje.
Maisto netoleravimas
Dažnai žmonės alergijomis vadina bet kokią organizmo reakciją į maistą, pavyzdžiui, pilvo pūtimą, kurį sukelia tam tikro maisto netoleravimas. Maisto netoleravimas gali atsirasti bet kokio amžiaus žmonėms. Paprastai fermentų veikla senstant darosi nebe tokia efektyvi, todėl būna, kad vyresnio amžiaus žmonės pradeda netoleruoti laktozės.
Rekomendacijos alergiškiems asmenims
Alergiški žmonės turi vengti produktų, galinčių sukelti alerginę reakciją. Ypač svarbu, kad alergiško vaiko auklėtojos ar mokytojos būtų informuotos apie pavojų ir žinotų, kaip elgtis, jei vaikui prasidėtų alerginė reakcija. Jei nustatyta alergija maistui, nederėtų eksperimentuoti ir patiems namų sąlygomis bandyti ragauti produkto su alergenu.
Baltymų koncentracijos nustatymo metodai
Laboratorijose naudojami įvairūs metodai baltymų koncentracijai nustatyti, įskaitant Lowry metodą, Bradfordo metodą, Biureto metodą ir BCA metodą. Šie metodai pagrįsti skirtingais baltymų cheminėmis savybėmis ir leidžia tiksliai įvertinti baltymų kiekį mėginiuose.
Lowry metodas
Lowry metodas yra vienas iš seniausių ir plačiausiai naudojamų baltymų koncentracijos nustatymo metodų. Jis pagrįstas baltymų reakcija su Folin-Ciocalteu reagentu, kuris sukuria mėlyną spalvą, kurios intensyvumas priklauso nuo baltymų koncentracijos.
Bradfordo metodas
Bradfordo metodas yra greitas ir patogus baltymų koncentracijos nustatymo metodas, pagrįstas baltymų reakcija su Coomassie Brilliant Blue G-250 dažikliu. Dažiklis jungiasi prie baltymų ir sukuria mėlyną spalvą, kurios intensyvumas priklauso nuo baltymų koncentracijos.
Biureto metodas
Biureto metodas yra baltymų koncentracijos nustatymo metodas, pagrįstas baltymų reakcija su vario jonais šarminėje terpėje. Reakcijos metu susidaro violetinis kompleksas, kurio intensyvumas priklauso nuo baltymų koncentracijos.
BCA metodas
BCA metodas yra jautresnis baltymų koncentracijos nustatymo metodas nei Biureto metodas. Jis pagrįstas baltymų reakcija su bicinchonino rūgštimi (BCA) vario jonų akivaizdoje. Reakcijos metu susidaro violetinis kompleksas, kurio intensyvumas priklauso nuo baltymų koncentracijos.
tags: #laboratorinis #kiausinio #baltymo #tyrimas #metodai